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알칼린포스파타제는 어떻게 추출되나요?

유전공학에서 널리 사용되는 알칼리인산분해효소에는 두 가지가 있는데, 하나는 대장균에서 추출한 BAP이고, 다른 하나는 소 소장에서 추출한 CIP이다. 두 알칼리성 포스파타제는 모두 DNA, RNA, rNTP 및 dNTP의 5' 인산기 제거를 촉매하여 5' 하이드록실 말단을 생성할 수 있습니다. 두 효소 반응 모두 Zn2+가 필요합니다. 차이점은 BAP는 내열성이 있는 반면 CIP는 70°C에서 10분간 가열하거나 페놀로 추출하면 비활성화된다는 점입니다. CIP의 비활성은 BAP보다 10~20배 더 높습니다. 따라서 CIP가 더 널리 사용됩니다. 알칼리성 포스파타제는 주로 다음과 같은 용도로 사용됩니다. ① DNA 및 RNA의 5'-인산 그룹을 제거한 다음 T4 폴리뉴클레오티드 키나아제의 촉매 작용 하에서 [r-32P] ATP를 사용하여 서열 분석을 수행합니다. 운반체 DNA의 인산기는 자가고리화를 방지하고, 배경을 감소시키며, 재조합 DNA의 검출률을 향상시킵니다.